【干货】鬼峰产生的原因及解决办法

什么叫鬼峰？在做液相色谱反相系统梯度洗脱时，有时会遇到仪器不进样也有出峰的情况，这种峰影响定量结果，也可使分析工作无法进行，由于它神出鬼没的特质，所以被称为鬼峰。那我们就来了解下，鬼峰出现的可能原因及排除方法。

在怀疑峰型异常是不是鬼峰时，我们首先可以通过仔细核查操作条件是否与分析方法一致，仪器工作状态是否正常来看有无操作失误，确定不是上述失误后，仪器不进样，或者进流动相，或者只运行方法看基线中是否还存在莫名的色谱峰来判断是否为鬼峰。从鬼峰出现的频率来看，一般来说，可以从两个大方面进行考虑：流动相和液相系统。

鬼峰产生的原因是多种多样的，根据本人的经验以及文献报道，将原因归纳为以下几个方面：1、流动相、样品稀释液、仪器或是容器中存在杂质，当梯度开始时由于有机相比例不高，洗脱能力不强，杂质在色谱柱柱头富集，随着流动相比例变化，洗脱能力增强，富集的杂质被洗脱，从而形成鬼峰。

2、流动相脱气不完全。空气在有机相和水中的溶解度不同，当水和有机相混合时，气泡就产生了。

3、操作问题。

试剂问题

1、有机溶剂

甲醇制备工艺相对乙腈来说较为简单，杂质含量也较少。但是由于甲醇紫外吸收范围比乙腈广，所以当使用紫外检测器时，尤其是波长较低时，尽量使用乙腈作为有机相，用甲醇的话漂移太大。而用作梯度色谱的乙腈质量要求较高，一般用进口梯度色谱专用乙腈能够很好的减少鬼峰的出现。

2、水

很多单位用自制蒸馏水作为水相，但是结果并不是很好。原因就是一些低沸点的有机杂质并不能够通过蒸馏除掉。有条件的尽量用HPLC级的纯水，没有条件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色谱条件比较严格也是有可能出问题的。

3、其它试剂

缓冲盐、TFA、EDTA等试剂也会对流动相造成很大的影响，尽量用纯度高的试剂配制流动相。

4、流动相配置好后预先超声脱气。

5、盛放流动相的容器或是量具受到污染。

这种污染可能来自于洗涤剂、铬酸洗液或是其他实验人员用完后的残留杂质。流动相容器的清洗一般用干净的水+有机溶剂涮洗就行，过多的清洗步骤反而可能造成二次污染。有时流动相容器的塑料盖碎片都有可能是杂质的来源。

6、pH计

很多pH计以聚碳酸酯作为外壳，然而聚碳酸酯是可以溶于有机溶剂的，所以尽量使用玻璃pH计来测量流动相的pH。

7、滤膜。

劣质的或者型号错误的滤膜往往是鬼峰出现的原因。

8、放置时间过长。

流动相在空气中暴露时间过长，就可能吸收空气中的有机杂质，有时流动相中的添加剂，例如TFA，时间长了会氧化从而产生杂质。

仪器问题

1、液相的流动相管路被污染。

长时间的使用含水量较高的流动相(尤其是加入缓冲盐的)，细菌就容易在管路中滋生，细菌的代谢产物或是细胞碎片能造成鬼峰。

2、输送泵故障，造成系统压力不稳，从而产生鬼峰。

3、单向阀堵塞。

造成系统压力不稳，从而产生鬼峰。早期岛津的液相单向阀貌似不能用纯乙腈作为流动相，现在应该已经得到改进。

4、在线脱气机脱气不完全。

5、两种流动相的有机相比例相差太大。

例如A为100%水，B为100%乙腈。在梯度条件允许的情况下尽量减少两中流动相之间的差距，降低空气在两中流动相中溶解度的差异，从而减少气泡的产生。

6、溶剂瓶和溶剂过滤头的污染。

长时间的使用纯水相或含水量较高的流动相（尤其是加入缓冲盐的），细菌容易滋生，细菌的代谢产物或是细胞碎片停留导致污染。如果流动相在使用完后长期未更换新的流动相瓶或者流动相瓶未做清洗，而是采用直接添加补充的方式也可能会导致鬼峰的产生。

此种情况建议制定好流动相瓶清洗和更换计划，进行更换或清洗。

此外，溶剂过滤头也可存在污染。去除溶剂瓶内的过滤头看鬼峰能否变小或消失，如果变小或消失则可以更换溶剂瓶内的过滤头。

7、来自样品残留。

样品可在仪器各个板块残留。我们可逐一进行排查。

a.确认问题来自进样器样品残留。

将进样器的入口和出口管线用两通直接连接，如果鬼峰问题解决则怀疑进样针，针座、六通阀转子污染问题，然后进行相关的清洗和更换。

Tips：在怀疑进样器残留问题前要先检查连接管线是否正常，不然也会导致鬼峰。

b.确认问题来自色谱柱的样品残留。

色谱柱可对流动相或系统流路内的强保留污染组分起到富集作用，在有机相比例随梯度程序变化的过程中而被冲洗出来。

将色谱柱更换成两通，如果鬼峰消除则是色谱柱被污染。可通过清洗色谱柱或者直接更换新的色谱柱解决。

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